熒光原位雜交FISH(fluorescence in situ hybridization)技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。它的基本原理是：如果待檢測(cè)的細(xì)胞或組織切片上的靶核酸與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶核酸與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素或直接標(biāo)記熒光素，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)或直接經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)進(jìn)行定性、半定量或相對(duì)定位分析的一種實(shí)驗(yàn)方法。

免疫熒光(IF)：以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)。用于檢測(cè)或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測(cè)或定位抗體。

應(yīng)用：通過(guò)原位雜交及免疫熒光雙染，可以在組織細(xì)胞中對(duì)核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析，可以用來(lái)從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

需要客戶提供：

組織：固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）組織樣本，常溫運(yùn)輸；

細(xì)胞：新鮮活細(xì)胞樣本（大于106）樣本，常溫運(yùn)輸；

切片：石蠟切片，常溫運(yùn)輸；冰凍切片以及細(xì)胞爬片，涂片-20℃運(yùn)輸；

實(shí)驗(yàn)信息：基因名稱及ID；

實(shí)驗(yàn)材料：適用于免疫熒光的一抗，原裝抗體不低于20ul；

簡(jiǎn)要實(shí)驗(yàn)步驟：

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1、 mRNA為檢測(cè)對(duì)象時(shí)，需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無(wú)RNA酶處理；

2、FISH切片保存時(shí)間較短，應(yīng)盡快取圖；

3、不同的抗體與原位雜交進(jìn)行雙標(biāo)時(shí)，可能會(huì)有影響，必要時(shí)進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)步驟調(diào)整，以避免相互之間的影響。

那這么好的實(shí)驗(yàn)方法怎么會(huì)沒(méi)有文章支撐呢，特意找到一篇提供給大家進(jìn)行參考~

RNA雙染(IF/FISH)文獻(xiàn)：Optimized RNA ISH, RNA FISH and protein-RNA double labeling (IF/FISH) in Drosophila ovaries

文獻(xiàn)中提供的實(shí)驗(yàn)流程：

IF-FISH檢測(cè)結(jié)果圖