一、包被抗原

       1. 用50mM 的碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原濃度為10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶標(biāo)板，4℃放置過夜。

       2. 第二天棄去包被液后，用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。

       3. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。

       4. PBST 洗滌5 次后，加入100μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗，37℃孵育1 小時(shí)。

       5. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。

二、包被細(xì)胞 

       1. 在96 孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞數(shù)為1 x 104 cells/well，37℃過夜培養(yǎng)。

       2. 第二天用PBS 洗滌培養(yǎng)板2-3 次。

       3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀釋）, 室溫下固定15 min。

       4. 用ddH2O 洗滌培養(yǎng)板3 次，并晾干，儲藏在2-8℃?zhèn)溆谩?/span>

       5. 用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。

       6. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。

       7. PBST 洗滌5 次后，加入100 μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗,37℃孵育1 小時(shí)。

       8. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸餾水稀釋至100 ml。                                                                                                                    

       ABTS 作為底物進(jìn)行顯色反應(yīng)(10ml)：

       0.2M Na2HPO4 2.4ml

       0.1M 檸檬酸2.6ml

       ddH2O 5ml

       ABTS 5mg

       H2O2(30%) 4 ul（用前加入）